炒青皮的黄酮类成分研究
作者：郭绪林 王铁军 郭敏杰 陈勇
单位：郭绪林(北京医科大学 药学院，北京 100083)；王铁军(北京医科大学 药学院，北京 100083)；郭敏杰(北京医科大学 药学院，北京 100083)；陈勇(北京医科大学 药学院，北京 100083)
关键词：炒青皮，橙皮甙，新橙皮甙，川陈皮素，红橘素
中国中药杂志000306 摘 要：目的：对青皮的醋炙品进行黄酮类成分研究。方法：用色谱法和光谱解析法。结果：分离得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个黄酮类化合物，分别鉴定为橙皮甙、新橙皮甙、川陈皮素和红橘素。结论：首次证明生、炒青皮均含有上述4种黄酮类成分。
Studies on Chemical Constituents of
Processed Green Tangerine Peel
, 百拇医药
GUO Xu-lin ，WANG Tie-jun，GUO Min-jie,CHEN Yong
(School of Pharmaceutical Sciences,Beijing Medical University,Beijing 100083)
Abstract：Objective:To study the chemical constituents of processed green tangerine peel(Citrus reticulata).Method:Using chemical techniques and spectroscopic analysis.Result:Four compounds were isolated from the peel and identified as hesperidin,neohesperidin,nobiletin and tangeritin.Conclusion： The compounds were obtained from this peel for the first time.
, 百拇医药
Key words：Citrus reticulata； hesperidin;neohesperidin;nobiletin;tangeritin▲
青皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其变种的幼果或未成熟果实的果皮。具有疏肝破气，消积化滞之功效。主治胸胁胃脘胀痛，疝气，食积，乳痈等症。现代研究表明青皮制剂有抗休克、升压等作用[1]。我们在研究中发现炒青皮提取物有明显促进胆汁分泌作用。
据报道青皮含有左旋对羟福林乙酸盐，并证明有升高血压的作用，另外尚含有多种氨基酸[2]。在一般的中药参考书中均记载青皮含有挥发油及黄酮甙，但未见有关黄酮类成分的研究文献。
中医药理论认为青皮其性“酷烈”，常醋炙用于临床以缓和其“酷烈”之药性。但未见有醋炙品现代研究的报道。我们在研究中发现青皮在醋炙后，其中橙皮甙的含量下降[3]。HPLC分析结果发现有新的成分生成。为了探讨醋炙对其所含黄酮类成分的影响，我们对青皮醋炙品的黄酮类成分进行了研究。
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1 药材、仪器和试剂
实验用青皮1994年5月采自四川成都地区，经本文作者鉴定为芸香科植物橘C.reticulata Blanco；按《药典》规定方法加醋炮制。熔点测定用X4熔点测定显微镜(温度计未校正)；IR测定用P-E983型红外分光光度计；UV测定用DU-7spectro phophometer(Bechman)；1H-NMR测定用XVR-300(Varian)，300MHz；13C-NMR测定XVR-300(Veiran)125MHz，溶剂DMSOd6(甙元用CDCl3)。MS测定用KYKY-ZHP5型(中国科学院科学仪器厂)，元素分析用P-E2400型元素分析仪，HPLC检测用SP-8810型泵，SP100型紫外检测器；检测波长283 nm，固定相键合硅胶(SP公司产ODS)柱；流动相：甲醇-冰醋酸-异丙醇-水(25∶5∶1.6∶69)，流速1 ml.min-1。聚酰胺购于浙江台州四青生化材料厂，硅胶为青岛海洋化工厂产薄层层析硅胶，其余化学试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 提取分离
炒青皮粉碎后，称取粗粉200 g置索氏提取器中，加苯-丁酮-甲醇(6∶1∶1)1 000 ml，回流提取48 h，回收溶剂至约300 ml，放置待结晶完全，过滤得总黄酮甙元组分。药渣挥尽溶剂后再加甲醇提取48 h。提取液放置析晶完全。过滤得总黄酮甙粗品。
总黄酮甙经聚酰胺柱分离得化合物Ⅰ50 mg及化合物Ⅱ60 mg。
总黄酮甙元部分经硅胶柱用氯仿洗脱得化合物Ⅲ和Ⅳ。
3 结构鉴定
化合物Ⅰ，细小白色针状结晶，质极轻，mp 258～260 ℃。元素分析：测定值(%)C 55.63，H 5.25；计算值(%)C 55.08，H 5.57。据元素分析及其它光谱数据推定其分子式为C28H34O15。盐酸-镁粉反应阳性。点于滤纸上，喷雾AlCl3乙醇溶液后黄绿色荧光增强；喷雾MgAc2溶液后荧光由黄绿色变为天蓝色，可能为二氢黄酮类化合物。
, 百拇医药
UV在330，283 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1：3470(OH)，2914(CH2)，1644(CO)，1603，1516，1441(CC)。FAB-MS m/z：433，301(100，甙元)，153，151，148，162，122，104。
1H-NMRδ:12.016(1H,s,5-OH)，9.118(1H,s,3′-OH)，6.901(3H,m,H-2′,5′,6′),6.126(1H,H-8)，5,463(1H,m,H-2)，3.150(2H,dd.H-3)，6.111(1H,6H)，4.970(1H,d,J=6.8,H-1″)，4.504(1H,H-1)，1.063(3H,m,H-6)。
13 C-NMR(DMSO)δ:196.82(C-4),164.81(C-7),162.86(C-5),162.20(C-9),147.83(C-4′),146.27(C-3′),130.76(C-1′),117.86(C-6′),114.05(C-2′),111.99(C-5′),103.22(C-10),96.31(C),95.47(C-8),78.34(C-2),42.08(C-3),55.67(CH3-4′),99.31(C-1″),76.22(C-3″),75.48(C-5″),72.95(C-2″),69.56(C-4″),66.10(C-6″),100.54(C-1),70.24(C-2),70.67(C-3),72.03(C-4),68.30(C-5),17.92(C-6)。
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化合物Ⅰ经4.5%HCl水解，水解液检查有葡萄糖和鼠李糖。以上数据与文献化合物5，7，3′-三羟基-4′-甲氧基-二氢黄酮-7-O-α-L-鼠李糖-β-D-葡萄糖甙(1-6)，即橙皮甙一致[4]。二者混合熔点不下降。
化合物Ⅱ，细小白色针状结晶，mp 240～242 ℃；元素分析：测定值(%)C 54.49，H 5.48；计算值(%)C 55.08，H 5.57。据元素分析及其它光谱数据推定其分子式为C28H34O15。盐酸-镁粉反应阳性，AlCl3可使其荧光显著增强，MgAc2使黄绿色荧光变为天蓝色。可能为二氢黄酮类化合物。
UV在330，283 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1：3499，3409(OH)，2923(CH2)，1640(CO)，1570，1514，1441(苯环CC)。FAB-MS m/z：610(M+，100)，518，301(甙元)，162，153，151，148，122，104。
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1H-NMRδ:12.033(1H,s,5-OH)，9.138(1H,s,3′-OH)，6.911(3H,m,H-2′,5′,6′),6.090(1H,d,J=2.4Hz,H-8)，6,073(1H,d,J=2.7Hz,H-6)，5.328(1H,d,J=2.8Hz,H-2)，2.749(2H,q.H-3),3.760(3H,s,4′-OCH3)，5.103(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)，5.091(1H,s,H-1)，1.147(3H,d,J=5.7,H-6)。
13 C-NMRδ:197.91(C-4),165.46(C-7),163.71(C-5),163.43(C-9),149.00(C-4′),146.76(C-3′),131.57(C-1′),119.43(C-6′),114.70(C-2′),112.90(C-5′),104.81(C-10),97.43(C-6),96.29(C-8),78.39(C-2),42.91(C-3),56.74(-OCH3),98.27(C-1″),79.48(C-2″),77.67(C-3″),70.32(C-4″),77.46(C-5″),61.47(C-6″),101.82(C-1),71.24(C-2),71.35(C-3)，72.81(C-4),69.65(C-5),18.76(C-6)。
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以上数据与新橙皮甙一致[4]，混合熔点不下降。
化合物Ⅲ,黄色结晶，mp 137～138 ℃，据MS及其它光谱数据推定分子式为C21H22O8。盐酸-镁粉反应阳性。
UV在348，270，248及210 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1：2940，1462，1360(CH3)，1644(CO)，1604，1584，1509，1462(苯环CC)，892，828(Ar-H)。EI-MS m/z：402(M+)，387(100，M-15)，示6位或8位有甲氧基存在，241(A1+1)，162(B1)，165(B2)，372(M-OCH3)。
1H-NMRδ:6.666(1H,s,3H)，7.421(1H,d,J=2.1Hz,H-2′)，6.997(1H,d,J=8.4Hz,H-5')，7.578(1H,dd,J=8.25,1.8Hz,H-6′)，3.956(3H,s,OCH3)，3.966(6H,s,OCH3×2),3.980(3H，s,OCH3),4.029(3H,s,OCH3)，4.109(3H,s,OCH3)。
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以上数据证明化合物Ⅲ为3′，4′，5，6，7，8-六甲氧基黄酮，即川陈皮素(nobiletin)，与文献数据一致[5]。
化合物Ⅳ，浅黄色针状结晶，mp 153～154 ℃，据MS及其它光谱数据推定分子式为C20H20O7。盐酸-镁粉反应阳性。
UV在322，270及215 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1:2937，1477，1367(-CH3),1640(CO),1584，1514，1460(苯环CC)，862，828(Ar-H)。EI-MS m/z：372(M+)，357(100，M-15)，示6位或8位有甲氧基存在。241(A1+1)，132(B1)，135(B2)。经MS数据库检索为4′，5，6，7，8-五甲氧基黄酮(4′，5，6，7，8-pentamethoxy-flavone)。
, 百拇医药
1H-NMRδ:7.901(2H,d,J=8.7Hz,H-2′，6′)，7.035(2H,d,J=9.6Hz,H-3′，5′)，6.740(1H，s,H-3),3.898(6H,s,OCH3)，3.955(3H,s,OCH3×2)，4,026(3H,s,OCH3)，4.114(3H,s,OCH3)。以上数据证明化合物Ⅳ为4′，5，6，7，8-五甲氧基黄酮，即红橘素(tangertin)，与文献数据一致[5]。
4 结果讨论
4.1 由于未见有青皮黄酮类成分的研究文献，将本研究所得到的各成分与未经炮制的青皮进行薄层比较，发现未炮制的青皮也存在有分离得到的各成分，说明炮制未使这些成分全部发生质的变化，但总黄酮及橙皮甙的含量测定说明炮制后被测成分含量确有明显下降[3，6]，可见炮制只对青皮中的黄酮类成分造成量的变化。
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4.2 对青皮炮制前后挥发油的含量进行测定，结果青皮挥发油含量1.25%(V/W，n=3)，而醋炙后青皮的挥发油含量仅为0.37%(V/W，n=3)，即炮制中约70%的挥发油损失。
4.3 按中医理论，青皮炮制的目的是缓解其“酷烈”之药性，而从本研究结果来看，在化学上，炮制可使其挥发油大部损失，黄酮类成分未发生质的变化而量发生变化，是否与其有关，尚待进一步的药理研究。
参考文献：
[1]王均默.橘皮和柑皮的药理研究.上海中医药杂志，1957，(9)：44.
[2]方新德，钱林建，沈培芝，等.青皮化学成分的研究.中药通报，1985，10(2)：29.
[3]王铁军，郭绪林，张京平.炮制及贮存时间对青皮中橙皮甙的影响.中国中药杂志，1997，22(3)：156.
[4]于德全，杨峻山，谢晶曦.分析化学手册.第五分册.北京：化学工业出版社，1989.270.
[5]Sunil K Talapatra,Swapan K Mukhopadhyay,Anup Bhattacharya,et al.Methoxylated Flavones of Fortunella Japonica.Phytochemistry,1975,14(1):309.
[6]陈康，叶桥.炮制对青皮中黄酮类成分的影响.中药材，1996，19(4)：185.
收稿日期：1999-07-18, 百拇医药
单位：郭绪林(北京医科大学 药学院，北京 100083)；王铁军(北京医科大学 药学院，北京 100083)；郭敏杰(北京医科大学 药学院，北京 100083)；陈勇(北京医科大学 药学院，北京 100083)
关键词：炒青皮，橙皮甙，新橙皮甙，川陈皮素，红橘素
中国中药杂志000306 摘 要：目的：对青皮的醋炙品进行黄酮类成分研究。方法：用色谱法和光谱解析法。结果：分离得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个黄酮类化合物，分别鉴定为橙皮甙、新橙皮甙、川陈皮素和红橘素。结论：首次证明生、炒青皮均含有上述4种黄酮类成分。
Studies on Chemical Constituents of
Processed Green Tangerine Peel
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GUO Xu-lin ，WANG Tie-jun，GUO Min-jie,CHEN Yong
(School of Pharmaceutical Sciences,Beijing Medical University,Beijing 100083)
Abstract：Objective:To study the chemical constituents of processed green tangerine peel(Citrus reticulata).Method:Using chemical techniques and spectroscopic analysis.Result:Four compounds were isolated from the peel and identified as hesperidin,neohesperidin,nobiletin and tangeritin.Conclusion： The compounds were obtained from this peel for the first time.
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Key words：Citrus reticulata； hesperidin;neohesperidin;nobiletin;tangeritin▲
青皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其变种的幼果或未成熟果实的果皮。具有疏肝破气，消积化滞之功效。主治胸胁胃脘胀痛，疝气，食积，乳痈等症。现代研究表明青皮制剂有抗休克、升压等作用[1]。我们在研究中发现炒青皮提取物有明显促进胆汁分泌作用。
据报道青皮含有左旋对羟福林乙酸盐，并证明有升高血压的作用，另外尚含有多种氨基酸[2]。在一般的中药参考书中均记载青皮含有挥发油及黄酮甙，但未见有关黄酮类成分的研究文献。
中医药理论认为青皮其性“酷烈”，常醋炙用于临床以缓和其“酷烈”之药性。但未见有醋炙品现代研究的报道。我们在研究中发现青皮在醋炙后，其中橙皮甙的含量下降[3]。HPLC分析结果发现有新的成分生成。为了探讨醋炙对其所含黄酮类成分的影响，我们对青皮醋炙品的黄酮类成分进行了研究。
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1 药材、仪器和试剂
实验用青皮1994年5月采自四川成都地区，经本文作者鉴定为芸香科植物橘C.reticulata Blanco；按《药典》规定方法加醋炮制。熔点测定用X4熔点测定显微镜(温度计未校正)；IR测定用P-E983型红外分光光度计；UV测定用DU-7spectro phophometer(Bechman)；1H-NMR测定用XVR-300(Varian)，300MHz；13C-NMR测定XVR-300(Veiran)125MHz，溶剂DMSOd6(甙元用CDCl3)。MS测定用KYKY-ZHP5型(中国科学院科学仪器厂)，元素分析用P-E2400型元素分析仪，HPLC检测用SP-8810型泵，SP100型紫外检测器；检测波长283 nm，固定相键合硅胶(SP公司产ODS)柱；流动相：甲醇-冰醋酸-异丙醇-水(25∶5∶1.6∶69)，流速1 ml.min-1。聚酰胺购于浙江台州四青生化材料厂，硅胶为青岛海洋化工厂产薄层层析硅胶，其余化学试剂均为分析纯。
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2 提取分离
炒青皮粉碎后，称取粗粉200 g置索氏提取器中，加苯-丁酮-甲醇(6∶1∶1)1 000 ml，回流提取48 h，回收溶剂至约300 ml，放置待结晶完全，过滤得总黄酮甙元组分。药渣挥尽溶剂后再加甲醇提取48 h。提取液放置析晶完全。过滤得总黄酮甙粗品。
总黄酮甙经聚酰胺柱分离得化合物Ⅰ50 mg及化合物Ⅱ60 mg。
总黄酮甙元部分经硅胶柱用氯仿洗脱得化合物Ⅲ和Ⅳ。
3 结构鉴定
化合物Ⅰ，细小白色针状结晶，质极轻，mp 258～260 ℃。元素分析：测定值(%)C 55.63，H 5.25；计算值(%)C 55.08，H 5.57。据元素分析及其它光谱数据推定其分子式为C28H34O15。盐酸-镁粉反应阳性。点于滤纸上，喷雾AlCl3乙醇溶液后黄绿色荧光增强；喷雾MgAc2溶液后荧光由黄绿色变为天蓝色，可能为二氢黄酮类化合物。
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UV在330，283 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1：3470(OH)，2914(CH2)，1644(CO)，1603，1516，1441(CC)。FAB-MS m/z：433，301(100，甙元)，153，151，148，162，122，104。
1H-NMRδ:12.016(1H,s,5-OH)，9.118(1H,s,3′-OH)，6.901(3H,m,H-2′,5′,6′),6.126(1H,H-8)，5,463(1H,m,H-2)，3.150(2H,dd.H-3)，6.111(1H,6H)，4.970(1H,d,J=6.8,H-1″)，4.504(1H,H-1)，1.063(3H,m,H-6)。
13 C-NMR(DMSO)δ:196.82(C-4),164.81(C-7),162.86(C-5),162.20(C-9),147.83(C-4′),146.27(C-3′),130.76(C-1′),117.86(C-6′),114.05(C-2′),111.99(C-5′),103.22(C-10),96.31(C),95.47(C-8),78.34(C-2),42.08(C-3),55.67(CH3-4′),99.31(C-1″),76.22(C-3″),75.48(C-5″),72.95(C-2″),69.56(C-4″),66.10(C-6″),100.54(C-1),70.24(C-2),70.67(C-3),72.03(C-4),68.30(C-5),17.92(C-6)。
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化合物Ⅰ经4.5%HCl水解，水解液检查有葡萄糖和鼠李糖。以上数据与文献化合物5，7，3′-三羟基-4′-甲氧基-二氢黄酮-7-O-α-L-鼠李糖-β-D-葡萄糖甙(1-6)，即橙皮甙一致[4]。二者混合熔点不下降。
化合物Ⅱ，细小白色针状结晶，mp 240～242 ℃；元素分析：测定值(%)C 54.49，H 5.48；计算值(%)C 55.08，H 5.57。据元素分析及其它光谱数据推定其分子式为C28H34O15。盐酸-镁粉反应阳性，AlCl3可使其荧光显著增强，MgAc2使黄绿色荧光变为天蓝色。可能为二氢黄酮类化合物。
UV在330，283 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1：3499，3409(OH)，2923(CH2)，1640(CO)，1570，1514，1441(苯环CC)。FAB-MS m/z：610(M+，100)，518，301(甙元)，162，153，151，148，122，104。
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1H-NMRδ:12.033(1H,s,5-OH)，9.138(1H,s,3′-OH)，6.911(3H,m,H-2′,5′,6′),6.090(1H,d,J=2.4Hz,H-8)，6,073(1H,d,J=2.7Hz,H-6)，5.328(1H,d,J=2.8Hz,H-2)，2.749(2H,q.H-3),3.760(3H,s,4′-OCH3)，5.103(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)，5.091(1H,s,H-1)，1.147(3H,d,J=5.7,H-6)。
13 C-NMRδ:197.91(C-4),165.46(C-7),163.71(C-5),163.43(C-9),149.00(C-4′),146.76(C-3′),131.57(C-1′),119.43(C-6′),114.70(C-2′),112.90(C-5′),104.81(C-10),97.43(C-6),96.29(C-8),78.39(C-2),42.91(C-3),56.74(-OCH3),98.27(C-1″),79.48(C-2″),77.67(C-3″),70.32(C-4″),77.46(C-5″),61.47(C-6″),101.82(C-1),71.24(C-2),71.35(C-3)，72.81(C-4),69.65(C-5),18.76(C-6)。
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以上数据与新橙皮甙一致[4]，混合熔点不下降。
化合物Ⅲ,黄色结晶，mp 137～138 ℃，据MS及其它光谱数据推定分子式为C21H22O8。盐酸-镁粉反应阳性。
UV在348，270，248及210 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1：2940，1462，1360(CH3)，1644(CO)，1604，1584，1509，1462(苯环CC)，892，828(Ar-H)。EI-MS m/z：402(M+)，387(100，M-15)，示6位或8位有甲氧基存在，241(A1+1)，162(B1)，165(B2)，372(M-OCH3)。
1H-NMRδ:6.666(1H,s,3H)，7.421(1H,d,J=2.1Hz,H-2′)，6.997(1H,d,J=8.4Hz,H-5')，7.578(1H,dd,J=8.25,1.8Hz,H-6′)，3.956(3H,s,OCH3)，3.966(6H,s,OCH3×2),3.980(3H，s,OCH3),4.029(3H,s,OCH3)，4.109(3H,s,OCH3)。
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以上数据证明化合物Ⅲ为3′，4′，5，6，7，8-六甲氧基黄酮，即川陈皮素(nobiletin)，与文献数据一致[5]。
化合物Ⅳ，浅黄色针状结晶，mp 153～154 ℃，据MS及其它光谱数据推定分子式为C20H20O7。盐酸-镁粉反应阳性。
UV在322，270及215 nm处有最大吸收(MeOH)。IR cm-1:2937，1477，1367(-CH3),1640(CO),1584，1514，1460(苯环CC)，862，828(Ar-H)。EI-MS m/z：372(M+)，357(100，M-15)，示6位或8位有甲氧基存在。241(A1+1)，132(B1)，135(B2)。经MS数据库检索为4′，5，6，7，8-五甲氧基黄酮(4′，5，6，7，8-pentamethoxy-flavone)。
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1H-NMRδ:7.901(2H,d,J=8.7Hz,H-2′，6′)，7.035(2H,d,J=9.6Hz,H-3′，5′)，6.740(1H，s,H-3),3.898(6H,s,OCH3)，3.955(3H,s,OCH3×2)，4,026(3H,s,OCH3)，4.114(3H,s,OCH3)。以上数据证明化合物Ⅳ为4′，5，6，7，8-五甲氧基黄酮，即红橘素(tangertin)，与文献数据一致[5]。
4 结果讨论
4.1 由于未见有青皮黄酮类成分的研究文献，将本研究所得到的各成分与未经炮制的青皮进行薄层比较，发现未炮制的青皮也存在有分离得到的各成分，说明炮制未使这些成分全部发生质的变化，但总黄酮及橙皮甙的含量测定说明炮制后被测成分含量确有明显下降[3，6]，可见炮制只对青皮中的黄酮类成分造成量的变化。
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4.2 对青皮炮制前后挥发油的含量进行测定，结果青皮挥发油含量1.25%(V/W，n=3)，而醋炙后青皮的挥发油含量仅为0.37%(V/W，n=3)，即炮制中约70%的挥发油损失。
4.3 按中医理论，青皮炮制的目的是缓解其“酷烈”之药性，而从本研究结果来看，在化学上，炮制可使其挥发油大部损失，黄酮类成分未发生质的变化而量发生变化，是否与其有关，尚待进一步的药理研究。
参考文献：
[1]王均默.橘皮和柑皮的药理研究.上海中医药杂志，1957，(9)：44.
[2]方新德，钱林建，沈培芝，等.青皮化学成分的研究.中药通报，1985，10(2)：29.
[3]王铁军，郭绪林，张京平.炮制及贮存时间对青皮中橙皮甙的影响.中国中药杂志，1997，22(3)：156.
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[5]Sunil K Talapatra,Swapan K Mukhopadhyay,Anup Bhattacharya,et al.Methoxylated Flavones of Fortunella Japonica.Phytochemistry,1975,14(1):309.
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收稿日期：1999-07-18, 百拇医药